L'Église assyrienne de l'Orient confesse le Saint-Esprit comme la troisième personne de la Trinité, ayant la même substance et la même gloire que le Père et le Fils. Le Saint-Esprit procède du Père (position orientale, rejetant le Filioque) et est le dispensateur de la vie et de la sanctification. Le Saint-Esprit opère dans la création, guide l'Église, inspire les prophètes et les apôtres, et demeure dans le cœur des fidèles.

L'Esprit est reçu dans le Baptême et est présent de manière particulière dans le mystère de l'Eucharistie. L'Église invoque l'Esprit dans l'Anaphore — la grande prière eucharistique — au cours de laquelle le pain et le vin sont transformés par l'Esprit dans le corps et le sang du Christ. La vie spirituelle des croyants dépend de l'illumination et de la sanction continue du Saint-Esprit. L'Église enseigne la communion de l'Esprit-Saint, particulièrement manifeste dans le don des charismata et dans l'unité du Corps du Christ. Le rôle du Saint-Esprit dans la sanctification et le perfectionnement des croyants est central à la théologie de l'Église.